2019年Henikoff博士点亮了CUT&Tag新星,发展到今天,CUT&Tag早已隐隐有超过或替代ChIP-seq的态势,对研究DNA-蛋白相互影响带来了更高效的专用工具。眼见为实,事实胜于雄辩信息来源文章内容:CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells
样版信息内容:人 K562 cells
1.频率稳定度高
比照ChIP-seq、CUT&Tag和CUT&RUN所得到的H3K27me3数据信息,发觉同样信息量(8M Reads)的情形下,三种方法相对应的性染色体pattern类似,CUT&Tag有最低声音分贝和最强大的信号值,而ChIP-seq需要更高的测序深度(50M Reads)才能实现去背景噪音的实际效果,一样,H3K4me1,H3K4me2和RNAPII数据信息也说明了CUT&Tag有更明显的数据信号聚集,这些结果表明CUT&Tag具有较高的频率稳定度。
2.可重复性好,反应速度快
比照ChIP-seq、CUT&RUN、CUT&Tag三种方法的H3K4me1数据信息,制作可重复性相关系数矩阵,数据显示CUT&Tag反复样品的数据信息有高度的相似度,反映了CUT&Tag的精确性高。
为了能量化分析 CUT&Tag、CUT&RUN、ChIP-seq 和ATAC-seq对H3K4me2的敏感性,统一使用MAC2 的默认参数开展call peak,发现同样的数据量前提下,CUT&Tag都有着最高信号值,这说明CUT&Tag他们具有较高的敏感度。
3.转录因子也适用
NPAT仅融合1号染色体异常和6号染色体上的80个染色质开放区域结构域,将NPAT结合位点与染色质开放区域结构域进行对比,数据信息数据显示组蛋白基因启动子地区reads的覆盖率超过99%,此外和ATAC-seq数据信息对比,发现K562基因里的开放式位等级偏少。表明CUT&Tag适用转录因子科学研究。
根据CUT&Tag、CUT&RUN和ChIP-seq三种方法对(CTCF)DNA结合蛋白展开分析,CUT&Tag所获得的reads网络信号远远高于此外两种方式。
4、可以进行低样本数试验
CUT&Tag可以对少量体细胞来操作,根据对H3K27me3和H3K27me2的CUT&Tag结果和单细胞生物数据信号结合结论较为,表明CUT&Tag能够用于低细胞表观基因组学剖析。
汇总
实验方案
CUT&Tag
ChIP-Seq
可重复性
高
低
需要体细胞数
至少低到60个
规定10M之上
步骤多元性
低
高,必须化学交联和精彩片段化
实际操作周期时间
短,1-2天
长,3-5天
数据信息频率稳定度
高
低
嘉因提议CUT&Tag和ChIP-Seq怎么选择?
绿色植物之外的物种,强烈推荐CUT&Tag
相对而言CUT&Tag具有更好的成功率和频率稳定度。不论是细胞样本或是机构样版,嘉因都可以很好的详细CUT&Tag实验和剖析。
绿色植物样版,强烈推荐ChIP-seq
绿色植物样版提核艰难,不太适合CUT&Tag,而且嘉因微生物具备很完善的花草ChIP-seq protocol,因此,绿色植物样版强烈推荐做ChIP-seq。